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真核細胞轉染試劑說(shuō)明書(shū),高效轉染試劑使用方法

更新時(shí)間:2024-02-04      點(diǎn)擊次數:625

EZ Trans細胞轉染試劑作為新一代的轉染試劑,其轉染原理是帶正電的陽(yáng)離子聚合物與核酸中帶負電的磷酸基團形成帶正電的復合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用,并通過(guò)胞吞作用進(jìn)入細胞。本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)李記生物的優(yōu)化處理,具有轉染效率高,細胞毒性低,操作簡(jiǎn)單,重復性好,適用范圍廣等特點(diǎn)。

以下為真核細胞轉染試劑說(shuō)明書(shū):

轉染試劑運輸與保存

藍冰運輸。4℃保存,有效期12個(gè)月。】:不可冷凍!

高效轉染試劑使用方法(以 24 孔板為例,其他培養皿中轉染請參考表1)

1. 接種細胞

對于貼壁細胞,轉染前18-24 h進(jìn)行鋪板(不含抗生素),使其在轉染時(shí)的密度大約在80%左右。對于懸浮細胞,轉染當天,配制EZ Trans-DNA復合物之前進(jìn)行鋪板,每500 µL生長(cháng)培養基中加入4~8×105cells。  

【注】:培養液中的血清不影響轉染效率。轉染試劑使用量受細胞類(lèi)型及其他實(shí)驗條件影響,建議初次使用時(shí)設置梯度進(jìn)行優(yōu)化最佳使用量。

2. 準備EZ Trans-DNA復合物

(1)對于每孔細胞,將1 μg質(zhì)粒DNA稀釋到40 μL無(wú)血清的高糖DMEM培養基(或者OPTI-MEM Ⅰ 培養基),混勻。

(2)對于每孔細胞,將3 μL EZ Trans轉染試劑稀釋到40 μL無(wú)血清的高糖DMEM培養基(或者OPTI-MEM Ⅰ 培養基),輕輕混勻。

【注】:無(wú)血清的高糖DMEM培養基是稀釋液,不能使用含血清的培養基進(jìn)行DNA和EZ Trans轉染試劑的稀釋。因為EZ Trans-DNA轉染復合物的形成過(guò)程不能含有血清。

(3)將稀釋好的EZ Trans轉染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒DNA中,輕輕混勻。

【注】:此混合的順序不能反向進(jìn)行。

(4)室溫放置10-15 min,以形成EZ Trans-DNA復合物。

3. 轉染細胞

(1)將上述80 μL EZ Trans-DNA轉染復合物均勻滴入到含細胞的培養皿中。輕輕晃動(dòng)培養皿或輕微振蕩,讓EZ Trans-DNA復合物分散均勻。

(2)在37℃,5% CO2培養箱培養6-18 h,去除含EZ Trans-DNA復合物的培養液,更換新的培養液,繼續培養至對轉入基因表達分析。

【注】:篩選穩定轉染細胞株,轉染細胞24 h后,將細胞傳代至新鮮的生長(cháng)培養基中(將細胞稀釋10倍以上),在37℃,5% CO2培養箱中孵育24 h,加入篩選培養基。在有轉染抗性基因相匹配的藥物篩選條件下,約 1~2周可篩選到耐藥性克隆,在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長(cháng)培養基。

注意事項

  1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

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